Патматериала при бешенстве

Автор: | 20.01.2019

Патматериала при бешенстве

ВЗЯТИЕ И ПЕРЕСЫЛКА ПАТОЛОГИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА ДЛЯ БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОГО И ПАТОЛОГОГИСТОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИИ

Данные вскрытия не всегда позволяют сделать заключение о причине смерти животного. Для подтверждения или установления диагноза, т. е. причины падежа животных, берут от них патологический материал и отправляют для исследования в ближайшую ветеринарную лабораторию. В одних случаях достаточно проведения бактериологического исследования (рожа свиней), в других — гистологического (лейкоз). При ряде заболеваний желательно провести оба исследования (туберкулез, паратиф).

Небольшие свежие трупы целесообразно направлять в лабораторию целиком. Если труп крупного животного, то для бактериологического исследования направляют отдельные органы, не консервируя их; в крайнем случае их пересылают в 30%-ном стерильном водном растворе глицерина.

В зависимости от характера заболевания берут для исследования тот или иной патологический материал. Так, для бактериологического исследования необходимо пересылать:

1) на рожу свиней — почку, селезенку, трубчатую кость;

2) на паратиф — часть печени с желчным пузырем, селезенку, брыжеечные лимфатические узлы, трубчатую кость;

3) на пастереллез — часть легкого с лимфатическими узлами, селезенку и трубчатую кость;

4) на туберкулез — куски измененных органов, регионарные лимфатические узлы с необызвествленными очагами;

5) на ящур — невскрывшиеся афты и т. д.

Из несвежих трупов обязательно нужно брать трубчатую кость. Пересылаемые в лабораторию органы помещают в стерильную посуду.

Для гистологического исследования необходимо соответствующим образом взять материал и правильно его зафиксировать. При взятии материала следует учитывать анатомо-гистологическое строение органов. Так, кусочки из почки, стенки кишечника необходимо брать с таким расчетом, чтобы попали все слои органа. Вырезая кусочки, следует учитывать и характер специфических изменений для той или иной болезни.

Для исследования берут кусочки толщиной 0,5-1 см с площади примерно 1 см 2 , вырезают их на границе пораженной и неизмененной ткани. Для гистологического исследования необходимо брать:

1) на лейкоз — лимфатические узлы из разных областей тела и органов, селезенку, сердце, печень, почку и сычуг;

2) на паратиф — печень;

3) на паратуберкулез — пораженный кишечник и регионарный лимфатический узел;

4) на инфекционную анемию лошадей — печень сердце, селезенку, почку, легкое;

5) на бешенство — аммонов рог, мозжечок и четверохолмие;

6) на туберкулез — пораженную часть органа и регионарный лимфатический узел;

7) на паразитарные заболевания, а также болезни, вызванные болезнетворными грибами,- пораженные части органов.

Здесь приведен далеко не полный перечень болезней, при которых необходимо проводить гистологическое исследование.

Взятые кусочки надлежит по возможности быстрее фиксировать, не промывая их. Фиксацию проводят в чистой стеклянной посуде в 10-15%-ном растворе формалина, т. е. берут 10 или 15 частей формалина и объем доводят водой до 100 частей. При низких температурах материал лучше фиксировать в 10%-ном растворе формалина, приготовленном на 70%-ном спирте. Количество любой фиксирующей жидкости должно превышать объем взятых кусочков в 10- 15 раз.

При пересылке патологического материала на любой вид лабораторного исследования необходимо направлять сопроводительную, в которой надлежит указать кто и куда направляет материал, из какого хозяйства, какой материал, количество банок и на что исследовать. Сообщают краткие клинические и патологоанатомические данные, желательно протокол вскрытия.

Патматериала при бешенстве

Глава 13. ПРАВИЛА ВЗЯТИЯ ПАТОЛОГИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА И ПЕРЕСЫЛКИ ЕГО ДЛЯ ЛАБОРАТОРНОГО ИССЛЕДОВАНИЯ

(Извлечение из Правил Главного управления ветеринарии Министерства сельского хозяйства СССР, утвержденных 24 июня 1971г.)

При необходимости определить или подтвердить причину заболевания или гибели животных (включая птиц, зверей, пчел, рыб), при подозрении на инфекционную или инвазионную болезнь или на отравление ветеринарный врач (фельдшер) обязан взять соответствующий патологический материал и направить его в ветеринарную лабораторию для исследования.

Во всех случаях взятия и пересылки материала специалист обязан руководствоваться изложенными ниже правилами, а также соответствующими инструкциями по борьбе с болезнями животных.

Взятие и пересылка патологического материала для бактериологического и вирусологического исследования. Патологический материал берут стерильными инструментами в стерильную посуду. Поверхность органа (ткани), от которого будут брать патологический материал, на месте разреза обжигают над пламенем или прижигают нагретой металлической пластинкой.

Патологический материал берут как можно раньше после смерти животного, особенно в теплое время года. При начавшемся разложении материал для исследования негоден.

В лабораторию материал отправляют в неконсервированном виде. Если доставить в лабораторию в течение ближайших 24—30 ч материал невозможно, то его консервируют.

Для бактериологического исследования патологический материал (органы или их части) консервируют в 30%-ном водном растворе химически чистого глицерина. Воду предварительно стерилизуют кипячением или автоклавированием в течение 30 мин. В качестве консерванта можно применять также стерильное вазелиновое масло. Материал заливают консервирующей жидкостью в количестве, в 4—5 раз превышающем его объем.

Материал, предназначенный для вирусологического исследования, консервируют в 30—50%-ном растворе химически чистого глицерина на физиологическом растворе поваренной соли. Физиологический раствор предварительно стерилизуют в автоклаве при 120 °С в течение 30 мин.

Небольшие трупы животных (поросята, ягнята, телята), а также трупы мелких животных посылают целыми в непроницаемой таре.

Трубчатые кости направляют целыми с неповрежденными концами. Предварительно их тщательно очищают от мышц и сухожилий и завертывают в марлю или полотно, смоченные дезинфицирующей жидкостью (5%-ный раствор карболовой кислоты). Кости можно также посыпать натрия хлоридом (поваренной солью) и завернуть в полотно или марлю.

Кишечник перед посылкой для бактериологического и вирусологического исследований освобождают от содержимого, а концы его перевязывают. На исследование посылают части кишечника с наиболее характерными патологическими изменениями. Помещают в банки с 30—40%-ным водным раствором глицерина или насыщенным водным раствором натрия хлорида. Объем консервирующей жидкости должен в 5—7 раз повышать объем взятого материала.

Кал для исследования отправляют в стерильных стаканах, пробирках или банках, которые закрывают пергаментной бумагой. От трупов животных кал можно послать в отрезке невскрытого кишечника, завязанного с обоих концов. В лабораторию кал должен быть доставлен не позднее 24 ч после взятия.

При посылке для исследования участков кожи берут наиболее пораженные части ее размером 10 х 10 см и кладут в стерильную, герметически закрывающуюся посуду.

Кровь, гной, слизь, мочу, желчь и другой жидкий патологический материал для бактериологического и вирусологического исследований посылают в запаянных пастеровских пипетках, стерильных пробирках или во флаконах, плотно закрытых стерильными резиновыми пробками.

Кроме того, выделения из различных полостей, естественных отверстий и др., предназначенные для микроскопического исследования (для обнаружения в них микробов, кровепаразитов и для определения лейкоцитарной формулы), посылают в виде мазков.

Предметные стекла кипятят в течение 10—15 мин в 1—2%-ном водном растворе соды, затем тщательно промывают чистой водой, насухо вытирают и помещают в раствор спирта и эфира, взятых в равных частях, где и хранят до употребления.

Кровь берут из вены ушной раковины или края верхушки уха, у птиц — с поверхности гребня или из подкрыльцовой вены. Шерсть на месте взятия крови выстригают, кожу протирают ватными тампонами, смоченными сначала спиртом и затем эфиром. Инструменты (иглы, скальпель) должны быть стерильными.

Первую каплю крови удаляют стерильной ватой (исключение делается при исследовании крови на пироплазмидозы, когда для мазка берут первую каплю крови), а следующую свободно выступившую каплю берут на предварительно подготовленное предметное стекло быстрым и легким прикосновением к капле поверхностью стекла. Затем стекло быстро поворачивают вверх каплей и удерживают между пальцами левой руки в горизонтальном положении. К левому краю капли прикасаются под углом 45° шлифованным краем другого предметного (или покровного) стекла. Как только капля равномерно распределится по ребру этого стекла, его быстро проводят по поверхности предметного стекла слева направо, не доводя до края на 0,5—1 см. Ширина мазков должна быть уже предметного стекла. Для каждого нового мазка берут свежую каплю крови.

Готовые мазки крови высушивают только на воздухе. В холодное время года мазки делают в теплом помещении или на стеклах, подогретых на крышке теплого стерилизатора.

Метод фиксации мазков зависит от цели исследования.

Правильно приготовленные мазки крови должны быть тонкими, равномерными и достаточной длины. На высушенных мазках и отпечатках острым предметом делают надпись с указанием номера или клички животного и даты приготовления мазка.

Мазки из тканей, гноя, органов и различных выделений готовят путем размазывания материала на предметном стекле стерильной палочкой или ребром другого предметного стекла до тонкого слоя. Частицы органов плотной консистенции, твердые узелки, а также вязкий материал заключают между двумя предметными стеклами и растирают. Затем стекла разъединяют, растаскивая их в противоположные стороны в горизонтальном направлении. Получаются два довольно тонких мазка. Иногда делают препараты-отпечатки. Для этого вырезанный острым скальпелем кусочек органа захватывают пинцетом и свободной поверхностью кусочка делают на стекле несколько тонких отпечатков.

Взятие материала для патологогистологического исследования. Материал берут от свежих трупов или убитых животных не позднее 12, а летом — 2—3 ч после смерти от тех органов или тканей, где обнаружены патологические изменения, а также из главнейших паренхиматозных органов. Из разных участков патологически измененных органов (тканей) вырезают небольшие тонкие (не более 1— 2 см толщиной) кусочки. Вместе с пораженными участками ткани захватывают и граничащую с ней нормальную ткань. При иссечении кусочка учитывают микроскопическое строение (структуру) того или иного органа (ткани). Так, кусочки из почки, надпочечника, лимфатического узла берут с таким расчетом, чтобы попадали оба слоя — корковый и мозговой; из головного мозга — серое и белое вещество; из селезенки — белую и красную пульпу; из легкого — части органа с бронхами и плеврой. Из сердца берут несколько кусочков: из мышцы правого и левого желудочков, правого и левого предсердий, папиллярных мышц и области клапанов. Из всех органов при иссечении захватывают и их капсулу. Из разных отделов желудочно-кишечного тракта вырезают небольшие кусочки размером 2 х 3 см и перед погружением в фиксирующую жидкость их растягивают на картон и прошивают белыми нитками.

Другие публикации:  Ангина болят ноги температура

Взятый материал помещают в фиксирующую жидкость (10%-ный водный раствор нейтрального формалина), объем которой в 4—5 раз превышает объем взятого материала. В холодное время года во избежание промерзания при пересылке материал, профилированный в формалине, перекладывают в 30—50%-ный раствор глицерина (приготовленный на 10%-ном растворе формалина), в 70%-ный спирт или в насыщенный раствор натрия хлорида.

Если формалина нет, то в качестве фиксирующей жидкости используют 96%-ный этиловый спирт или ацетон. При применении спирта толщина кусочков не должна превышать 0,5 см. Для гистохимических исследований патологический материал можно фиксировать также в жидкости Карнуа (спирт абсолютный — 60 мл, хлороформ — 30 мл и ледяная уксусная кислота — 10 мл) или в жидкости Буэна (концентрированная пикриновая кислота — 15 мл, формалин — 5 мл, ледяная уксусная кислота — 1 мл). Фиксирующую жидкость меняют каждые сутки до тех пор, пока она не станет прозрачной. Оптимальная температура фиксации 37 °С.

Патологический материал фиксируют в стеклянной или в крайнем случае в глиняной посуде.

На банку с кусочками органов и тканей наклеивают этикетку, на которой указывают номер или кличку животного и кому принадлежит, а внутрь ее опускают кусочек плотной бумаги или картона с написанным на нем простым (не химическим) карандашом номером животного.

Помещать в посуду несколько объектов исследования от разных животных можно только при том условии, если каждый из них завязывают в марлю вместе с отдельной этикеткой.

Упаковка и пересылка патологического материала. Трупы мелких животных, части трупов крупных животных и отдельные органы в свежем (нефиксированном) виде отправляют для исследования в лабораторию только с нарочным. Посылаемый материал, особенно от животных, подозрительных по заболеванию инфекционной болезнью, тщательно упаковывают в плотный деревянный или металлический ящик, чтобы предупредить возможность рассеивания возбудителя инфекции в пути. Перед упаковкой материал завертывают в холст или мешковину, смоченную дезинфицирующим раствором (фенольным креолином, лизолом, известковым молоком), обертывают целлофаном или полиэтиленовой пленкой и кладут в ящик со стружками, мякиной или опилками.

Части органов, жидкости, отправляемые в лабораторию почтой в фиксированном или консервированном виде, помещают в герметически закупоренную стеклянную посуду с притертой стеклянной, пластмассовой, резиновой или корковой пробкой. Пробку закрепляют проволокой или бечевкой и заливают менделеевской замазкой (сургучом, смолкой, парафином или воском), чтобы укупорка была непроницаемой для жидкости. Укупоренную посуду вкладывают в прочно сбитый ящик, плотно обкладывают ватой, паклей, стружками, опилками или другим упаковочным материалом.

При пересылке почтой или с нарочным патологического материала от животных, подозрительных по заболеванию инфекционной болезнью, или явно инфицированного материала упаковка должна гарантировать доставку материала в целости и исключить возможность рассеивания возбудителей инфекции. На лицевой стороне посылки вверху должны быть надписи: «Осторожно — стекло» и «Верх».

Стеклянную посуду, в которой заключен посылаемый материал с подозрением на наличие особо опасных болезней (сап, сибирская язва, эмфизематозный карбункул, бруцеллез, туляремия, перипневмония крупного рогатого скота, чума крупного рогатого скота, чума свиней, псевдочума птиц, ящур, бешенство), обязательно упаковывают в металлическую коробку, которую запаивают, пломбируют или опечатывают, а затем упаковывают еще в деревянный ящик.

Если такой материал отправляют с нарочным, его кладут в стеклянную посуду, герметически закупоривают и помещают в деревянный ящик.

Взятие и отправка патологического материала при подозрении на отравление. Подозрение на отравление могут вызвать следующие признаки:

а) характерный запах содержимого желудка (горькоминдальный, чесночно-хлороформенный и т. п. при исключении запаха примененных лекарств);

б) окраска содержимого желудка: желтая (от азотной и пикриновой кислот, солей хрома), зеленая, синяя (от солей меди) или иного цвета;

в) кровянистое содержимое желудка;

г) подозрительные включения в содержимом желудка — белые кристаллы сулемы и стрихнина, нерастворившиеся белые кристаллы мышьяка;

д) набухшие, увеличенные, дряблые, легко разрывающиеся серо-желтой окраски и т. п. слизистая оболочка желудка, почки, сердце;

е) поражения начальных отделов пищеварительного тракта (ротовой полости, пищевода, желудка);

ж) изменение цвета и консистенции крови.

При подозрении на отравление в лабораторию направляют материал от трупов павших животных для химического и гистологического исследований. Одновременно с целью определения источника отравления посылают все корма (по 1 кг корма каждого вида), которые скармливали животным. Обязательно посылают остатки кормов из кормушки.

Для химического исследования в лабораторию посылают в отдельных банках следующий материал:

а) часть пищевода и пораженную часть желудка с содержимым (в количестве 0,5 кг), а от крупного и мелкого рогатого скота и верблюдов — часть пищевода, сычуга и небольшое количество содержимого из разных мест сычуга, рубца.

Желудок и его содержимое берут в следующем порядке.

При вскрытии трупа после осмотра внутренних органов перевязывают лигатурами пищевод и двенадцатиперстную кишку вблизи стенки желудка (по две лигатуры) и перерезают между ними. Желудок извлекают и кладут в кюветы, а затем вскрывают. Содержимое желудка предварительно (не выбирая из желудка) перемешивают (нельзя использовать металлические предметы), после чего осторожно, чтобы не загрязнить, берут часть его;

б) отрезок тонкого кишечника (длиной до 40 см) в наиболее пораженной части вместе с содержимым (до 0,5 кг);

в) отрезок толстого кишечника ^длиной до 40 см) в наиболее пораженной части вместе с содержимым (до 0,5 кг);

г) часть печени (0,5—1 кг) с желчным пузырем (от крупных животных), печень целиком (от мелких животных);

е) мочу в количестве 0,5 л;

ж) скелетную мускулатуру в количестве 0,5 кг.

Кроме того, в зависимости от особенностей предполагаемого отравления дополнительно посылают:

а) при подозрении на отравление через кожу (путем инъекции) — часть кожи, клетчатки и мышцы из места предполагаемого введения яда;

Патматериала при бешенстве

Клинические признаки и течение болезни. У Собак Инкубационный период длится от нескольких дней до нескольких месяцев (в среднему 2-8 недель), что зависит от века, индивидуальной резистентности животного, расстояния от места укуса к председателю, размеров и глубины раны, количества и вирулентност вируса. Перебежал болезни всегда острый. Клиническая картина характеризуется повышенной возбуждаемостью и значительной агрессивностью, которые изменяются депрессией, развитием параличей, слюнотечением. Определяют несколько форм клинического проявления бешенства: буйная, паралитическая, атипова и особая африканская форма — улуфато.

При буйной форме бешенства четко выраженные три стадии развития болезни: продромальная, или меланхоличная, стадия возбуждения, или маниакальн, и паралитическая, или депрессивная. Продромальная стадия длится 1,5-2 поры, характеризуется изменением обычного поведения собаки и постепенным возрастанием клинических признаков болезни. В начале болезни собака становится невнимательной к хозяину, не сразу откликается на призыв, тяжело поднимается с своего места, нередко бывает очень кроткой, беспричинно лает, щелкает зубьями. С развитием болезни собака старается забиться в темные уголки, глотает инородное тело, куски дерева, тряпки. В отдельных случаях раздирает зубьями место укуса. Под конец второго дня появляется разлад акта глотание, собака не затрагивать корм, не пьет воду. В этот период заболевших собак часто доставляют в больницу с просьбой удалить из глотки кость, которой якобы подавилось животное. Со временем усиливается слюнотечение, появляется стремление укусить человека или животного. Стадия Возбуждения Длится 3-4 поры. Характеризуется резко выраженными нападениями буйства, стремлением собаки убежать из дома, большой агрессивностью к другим животным, в особенности собак, попытками беспощадно их кусать. Усиливается слюнотечение, развивается косоглазие, водобоязнь. Постепенно стадия возбуждения переходит в Паралитическую Стадию, которая длится 2-4 поры. Эта стадия характеризуется быстрым развитием параличей мышц задних концовок, хвоста, туловища, прямой кишки, мочевого пузыря. Животное очень изможденная, шерсть всклокочена, глаза глубоко западают, нижняя челюсть отвисает, язык вываливается наружу, из рта вытекает много слюны. Походка вследствие пареза задних концовок становится шаткой, потом животное вообще не может подниматься. Гибель наступает через 6-8 пор от начала болезни.

При тихой форме бешенства возбуждение выражено слабо или его вообще не бывает. Тихая форма наблюдается в случае заражения собак от лисиц, характеризуется депрессией, быстрым развитием параличей, сильным слюнотечением, затруднением во время глотания. Гибель наступает на 2 — 4-ту пору болезни.

Атиповая форма характеризуется подострым течением. Наблюдается истощение, атрофия мышц, гастроентерит, а также поздние параличи. Собаки Не проявляют агрессивности. Атиповая форма случается очень редко.

Улуфато — особая форма африканского бешенства, при которой перебежал болезни значительно более легкий, чем бешенство в странах воздержанного климата, и характеризуется параличами отдельных мышц. Возможное выздоровление больного животного.

У Котов Болезнь проходит в буйной форме с высокой агрессивностью, которая представляет значительную опасность для людей. Гибель котов наступает на 2 — 5-ту пору после паралича задней части тела.

У Большого рогатого скота Преобладает тихая форма бешенства. При этой форме болезни из ротовой пустоты выделяется много слюны, в участке укуса появляется свербеж, обнаруживаются парезы и параличи концовок, сосудистые сокращения отдельных групп мышц. Наблюдается частый хриплый рев, затрудненное глотание, частое мочевыделение. Гибель скота наступает на 3 — 6-ту пору болезни. При буйной форме резко повышается рефлекторная возбуждаемость, отмечается сосудистое сокращение отдельных мышц. Глаза вытаращены, животное беспокоится, скрежещет зубьями, бьет ногами и рогами, хрипло ревет, часто проявляет агрессивность относительно собак, реже — к другим животным иd людей. Нападения буйства изменяются периодом покоя и повторяются через разные промежутки времени. Аппетит и жвачка отсутствуют, из ротовой пустоты выделяется большое количество слюны. Нередко признаком бешенства у рогатого скота является зуд и расчесы кожи на месте укуса. Гибель наступает внезапно, во время нападения буйства или при симптомах общей слабости, бульбарного паралича и быстрого снижения температуры тела.

Другие публикации:  Что дают детям при ротавирусной инфекции

У Овец Болезнь длится 3-5 пор, у коз — 8 пор, всегда заканчивается параличами и смертью. У больных животных наблюдается агрессивность, хриплое, глухое, протяжное блеяние, слюнотечение, скрежетание зубьями, затрудненное глотание. Гибель наступает на 3 — 6-ту пору болезни.

У Коней Бешенство наблюдается сравнительно редко. При буйной форме проявляется беспокойством, иногда — агрессивностью, стремлением убежать. Из ротовой пустоты вытекает много слюны, губы судомно сжатые, зрачка расширенные. Усиливается половое возбуждение, возможные нападения судорог жевательных и дыхательных мышц. Частым признаком бешенства коней есть свербеж на месте укуса. Заболевший кон нападает на животных и людей, старается их укусить или ударить, срывается из коновязи, натыкается на препятствия, ржание становится хриплой. Нападения буйства изменяются периодом угнетения, походка становится шаткой, глотание затрудняется, выпитая вода выливается назад через ноздри. Гибель наступает на 3 — 5-ту пору болезни. При тихой форме кон придавлен, упирается председателем в стену или кормушку, из ротовой пустоты выделяется много слюны. Развиваются параличи глотательных мышц, прогрессируют параличи задней части тела, наступает быстрая смерть.

У Свиней Болезнь сопровождается беспокойством, хрюканьем, сильным слюнотечением. Иногда на месте укуса появляется свербеж, на 2 — 4-ту пору после появления параличей наступает смерть.

У Диких животных Характерным признаком бешенства есть отсутствие страха перед людьми, а также агрессивность. Гидрофобии не бывает. Перед гибелью в них развиваются парезы и параличи концовок.

У Человека Заболевания на бешенство связанное с укусами больных собак, котов и других животных. В начале болезни наблюдаются лихорадка, придавленное состояние, свербеж и боли в участке укуса, со временем появляются боязливость, беспокойство, разлад дыхания и глотание, слюнотечение, повышенное рефлекторное возбуждение и судороги. Во время попытки проглотить воду развиваются мучительные судороги. Вскоре отвращение к воде наблюдается даже при виде стакана или шума воды. Больной галлюцинирует, иногда свирепствует, из рта выделяется много слюны. Бешенство у людей всегда заканчивается летально, смерть наступает на 2 — 3-тю пору болезни. Перед смертью развиваются параличи мышц лица, языка, глаз, концовок, туловища.

Патологоанатомические изменения. При бешенстве не специфические. Трупы животных изможденные, на коже могут быть следы укусов, незалеченных ран. При разрезе проявляют кровоизлияния, гиперемию слизистых оболочек ротовой пустоты и неба, набух языка. Желудок обычно пустой, иногда содержит инородный тела. Слизистая оболочка травного канала отекшая, с кровоизлияниями разного размера и формы. Оболочки мозга также отекшие и гиперимированные. Кровь темно-красного цвета, не свертывается. Во время гистологического исследования главного и спинного мозга проявляют ячейки дисемінованого негнойного энцефаломиелита. Чрезвычайно большое диагностическое значение имеет нахождение в цитоплазме нейронов специфических ацидофильных включений — телец Бабеша — Негре с базофильной зернистостью, которые в 65-85 % Случаев дают возможность обнаружить заболевание на бешенство.

Диагностика. Предшествующий диагноз для употребления неотложных мер устанавливают на основе анамнеза, анализа существующей эпизоотологической ситуации относительно бешенства, клинических признаков болезни. Окончательный диагноз устанавливают по результатам лабораторных исследований.

Лабораторная диагностика. Лабораторные исследования на бешенство проводят вне очереди, а о результатах немедленно сообщают врача ветеринарной медицины, что прислал патологический материал. Разрез трупа, удаление мозга, отбор проб и их исследования осуществляют при суровом соблюдении мероприятий личной профилактики — надевают спецодежду, руки защищают двумя парами перчаток (хирургическими и анатомическими), глаза закрывают защитными очками, нос и рот прикрывают 6-пластовой марлевой повязкой. В лабораторию для исследования на бешенство присылают нарочным свежие трупы мелких животных или председателя погибшего или забитого большого животного. Для проведения биопробы направляют главный мозг (свежий или консервированный в С — 50 %-м растворе глицерина). Патологический материал может быть тщательно запакован в герметичную тару с притертой пробкой, залитой парафином, а труп животного помещенный в любой герметичный водонепроницаемый контейнер.

Лабораторная диагностика включает микроскопические исследования главного мозга животных с целью выявления телец-включений Бабеша — Негре, серологические исследования за РОД для выявления специфического рабічного антигена, а также проведение биологической пробы на белых мышах и кролях.

Для микроскопического выявления телец-включений Бабеша — Негре готовят мазки, мазки-отражения и гистологические срезы из аммониевого рога, коры главного мозга, мозжечка (при буйной форме бешенства), а также из продолговатого и спинного мозга (при паралитической форме бешенства). В гистологических препаратах тельца-включения имеют округлую, овальную или немного удлиненную форму, размер от 0,24 до 27 мкм. Размещаются между ядром и одним из рогов нейрона или в его отростке. Внутри телец Бабеша — Негре проявляют маленькие (0,25-0,5 мкм) базофильные зернистые включения, которые дают возможность надежно дифференцировать их от других структурных элементов клетки. В отличие от мазков, где выявление телец Бабеша — Негре возможное лишь в случае значительной их количества, в гистологических препаратах быстро разыскиваются даже одиночные включения. Выявление в патологическом материале цитоплазматичних телец-включений Бабеша — Негре есть безусловно достоверным показателем бешенства, а их отсутствие не выключает этой болезни. Следует иметь в виду, что телец Бабеша — Негре никогда не бывает в нервных клетках больных на бешенство лисиц и корсаков, а также в мозга покусанных ними животных.

Для серологічних исследований за РОД используют неконсервированный главный мозг животных, которые погибло от уличного бешенства, или мозг зараженных для биопробы белых мышат. Постановка реакции диффузной преципитации в агаровом геле дает возможность установить диагноз относительно бешенства в течение одной поры, даже при исследовании загнивающего патологического материала. Рабічний антиген в мозга инфицированных животных можно обнаружить также с помощью имунофлуоресцентного метода, которые используют для быстрого установления предшествующего диагноза.

Биологическую пробу проводят на 6-10 белых мышатах массой 8-10 г и на 4 кроликах массой 1,5 кг, которых заражают интрацеребрально и подкожно надосадовою жидкостью 10 %-ой суспензии мозга. В случае положительного результата биопробы мышата заболевают и гибнут через 7-15 пор после заражения, кроли — через 16-21 пору. Главный мозг погибших или убитых подопытных животных исследуют на наличие телец Бабеша — Негре за РІФ или РДП. В сомнительных случаях ставят РН на мышатах.

Дифференциальная диагностика. Предусматривает необходимость исключения болезни Ауэски, острого менингоенцефалита, чумы собак. При болезни Ауэски проявляют розчухування, не бывает агрессивности, отклонений в аппетите, параличей нижней челюсти. В клетках главного мозга отсутствуют тельца Бабеша — Негре. Острый менингоэнцефалит характеризуется спорадичностью, отсутствием укусов, а также специфических телец-включений. Чума собак отличается высокой контагиозностью, продолжительным течением болезни, наличием конъюнктивита и ринитов. Нет агрессивности, не бывает параличей мышц нижней челюсти. Возможное выздоравливание больных животных.

Вирус бешенства

Бешенство — острая инфекционная болезнь, протекающая с тяжелым поражением нервной системы, как правило, с летальным исходом.

Восприимчивы человек и все теплокровные животные. Бешенство регистрируется в разных странах мира.

Характеристика возбудителя. Вирус относится к семейству Rhabdoviridae, роду Lyssavirus. РНК-содержащий. Геном представлен единой односииралыюй линейной молекулой минус-РНК. Вирионы вируса состоят из нуклеокапсида спиральной симметрии и липопротеидной оболочки с гликопротеиновыми булавовидными выступами. Вирион пулеобразной формы, средний размер его 180-175 нм.

Устойчивость к физико-химическим воздействиям. Низкие температуры консервируют вирус. Для него губительны высокие температуры (80—100 °С), в гниющем материале вирус может сохраняться до двух недель. Дезинфицирующие средства (растворы формальдегида, едкой щелочи, хлорной извести) в обычных концентрациях действуют на вирус губительно.

Антигенная структура. Вирионы вируса бешенства содержат гликопротеидный (наружный) и нуклеокапсидный (внутренний) антигены Гликопротеидный антиген индуцирует образование вируснейтрализующих и антигемагглютинирующих антител и обеспечивает развитие иммунитета у животных, а нуклеокапсидный — комплементсвязывающих и преципитирующих антител.

Вирус бешенства имеет 4 серотипа (прототипы): вирус бешенства, Лагос, Мокола, Дювенхейдж. Эпизоотические штаммы вируса бешенства в иммунобиологическом отношении родственные, но различаются по вирулентности. Все выделенные штаммы вируса по вирулентности разделяют на 5 групп. Штаммы первой группы характеризуются высокой, а пятой группы — низкой вирулентностью.

Спектр патогенности вируса тесно связан с его экологией, которая имеет особенности. Так, необходимо различать два основных и независимых эпизоотических проявления лиссавирусной инфекции:

1) эпизоотии бешенства, поддерживаемые наземными животными (лисицы, волки, енотовидные собаки, шакалы, мангусты, скунсы, еноты-полоскуны и др.);

2) эпизоотии хироптерного происхождения, поддерживаемые вампирами, насекомоядными и плотоядными летучими мышами.

С 1960-х годов бешенство диких животных стало преобладающим. Основным резервуаром и источником инфекции оказались лисицы и другие дикие животные. Болезнь у них может протекать латентно, обеспечивая персистенцию вируса в естественных условиях. Бешенство собак при городских эпизоотиях, как правило, заканчивается их гибелью.

Антигенная активность. Животные, иммунизированные против бешенства, продуцируют вируснейтрализующие, комплементсвязывающие, преципитирующие, антигемагглютинирующие и литические (разрушающие клетки, зараженные вирусом, в присутствии комплемента) антитела.

Вирус обладает гемагглютинирующими свойствами в отношении эритроцитов гусей, кур, морских свинок, овец, человека (группы 0). Обычно реакцию гемагглютинации ставят с эритроцитами гуся при 0—4 °С, pH 6,2—6,4. Между инфекционной и гемагглютинируюгцей активностью существует линейная зависимость.

Культивирование вируса. В лабораторных условиях вирус можно культивировать на лабораторных животных (мышатах, кроликах, хомячках, морских свинках и др.) при интрацеребральном методе сражения. Вирус репродуцируется в первичных и перевиваемых культурах клеток (почках сирийского хомячка, эмбрионах овец, телят, ВНК-21, клетках невриномы Гассерова узла крысы и др.). В первых пассажах вирус размножается медленно, не вызывая ЦПД. К вирусу бешенства после предварительной адаптации восприимчивы и куриные эмбрионы.

Экспериментальная инфекция. Легко воспроизводится на всех видах теплокровных животных.

Клинические признаки. Продолжительность инкубационного периода зависит от места укуса, характера раны, количества и вирулентности попавшего в рану вируса, вида, возраста и резистентности покусанного животного. Инкубационный период длится от одной недели до года и даже дольше. Клиническое проявление болезни в основном одинаково у всех животных, но наиболее типично оно у собак, у которых можно наблюдать как буйное, так и тихое (паралитическое) течение болезни. У крупного рогатого скота бешенство может протекать атипично (потеря аппетита, атония рубца, паралич глотки, слюнотечение). Стадии возбуждения может не быть.

Другие публикации:  Цитомегаловирус в моче на пцр

Патологоанатомические изменения. Вскрывать подозрительных по заболеванию бешенством животных в полевых условиях запрещено.

У мясоядных (в основном у собак) в желудке можно обнаружить инородные предметы.

Локализация вируса. Вирус бешенства обладает выраженной нейропробазией. Проникая центростремительно с периферии (место укуса) по нервным стволам в центральную нервную систему, в организме он распространяется центробежно по периферическим нервам и попадает в разные органы, включая слюнные железы.

В организме вирус локализуется главным образом в центральной нервной системе, а также в слюнных железах и слюне. Доказано нахождение вируса в некоторых внутренних органах. Из организма выделяется со слюной, через легкие, кишечник и с мочой.

Источник инфекции — больные животные. Они передают вирус во время укуса. Возможно заражение при ослюнении поврежденной кожи. Плотоядные животные могут заражаться при поедании головного и спинного мозга погибших от бешенства животных. Доказана возможность заражения бешенством аэрогенным путем (в местах, где имеются летучие мыши). До 1960-х годов основным источником распространения бешенства были собаки и кошки, позднее лисицы, волки, корсаки и другие дикие животные.

Диагностика. Диагноз на бешенство ставят на основании эпизоотологических, клинических данных и результатов лабораторных исследований, имеющих решающее значение.

При работе с больными животными и инфекционным материалом необходимо строго соблюдать меры личной безопасности: надевать резиновые перчатки, халаты с нарукавниками, резиновый или полиэтиленовый фартук, резиновые сапоги, защитные очки, защитную маску на лицо.

Лабораторная диагностика. Для исследования на бешенство направляют в лабораторию свежие трупы мелких животных целиком, а от крупных и средних животных — голову с двумя первыми шейными позвонками. Трупы мелких животных перед отправкой на исследование обрабатывают инсектицидами.

Патологический материал упаковывают в пластмассовые мешки, вкладывают в плотно закрывающиеся ящики с влагопоглощающей прокладкой, пропитанной дезинфектантом. Материал и сопроводительное письмо, в котором указывают отправителя и его адрес, вид животного, анамнестические данные и обоснование подозрения в заболевании животного бешенством, дату и подпись врача, отправляют с нарочным.

Лабораторная диагностика включает: обнаружение вирусного антигена в РИФ и РДП, телец Бабеша—Негри и биопробу на белых мышатах.

РИФ. Для данной реакции биопромышленность выпускает флуоресцирующий антирабический γ-глобулин.

На обезжиренных предметных стеклах готовят тонкие отпечатки или мазки из различных отделов головного мозга левой и правой стороны (аммонов рог, кора полушарий, мозжечок и продолговатый мозг). Готовят не менее двух препаратов каждого отдела мозга. Можно также исследовать спинной мозг, подчелюстные слюнные железы. Для контроля делают препараты из мозга здорового животного (обычно белой мыши).

Препараты высушивают на воздухе, фиксируют в охлажденном ацетоне (минус 15—20 °С) от 4 до 12 ч, высушивают на воздухе, наносят специфический флуоресцирующий γ-глобулин, помещают во влажную камеру при 37 °С на 25—30 мин. Затем тщательно промывают физиологическим раствором или фосфатным буфером с pH 7,4, споласкивают дистиллированной водой, высушивают на воздухе, наносят нефлуоресцирующее иммерсионное масло и просматривают под люминесцентным микроскопом. В препаратах, содержащих антиген вируса бешенства, наблюдают разной величины и формы флуоресцирующие желто-зеленым цветом гранулы в нейронах, но чаще вне клеток. В контроле подобного свечения не должно быть, нервная ткань обычно светится тусклым сероватым или зеленоватым цветом. Интенсивность свечения оценивают в крестах. Отрицательным считают результат при отсутствии специфической флуоресценции.

Материал от животных, вакцинированных против бешенства, нельзя исследовать в РИФ 3 мес после прививки, так как может быть флуоресценция антигена вакцинного вируса.

В РИФ не подлежат исследованию ткани, консервированные глицерином, формалином, спиртом и т. д., а также материал, имеющий признаки даже незначительного загнивания.

РДП в агаровом геле. Метод основан на свойстве антител и антигенов диффундировать в агаровом геле и при встрече образовывать видимые визуально линии преципитации (комплекс антиген + антитело). Применяют для обнаружения антигена в мозге животных, павших от уличного вируса бешенства, или при экспериментальной инфекции (биопроба).

Реакцию ставят на предметных стеклах, на которые наливают 2,5—3 мл расплавленного 1,5 %-ного раствора агара.

Агаровый гель: агар Дифко — 15 г, натрия хлорид — 8,5 г, 1%-ный раствор метилового оранжевого в 50%-ном этиловом спирте — 10 мл, мертиолят — 0,01 г, дистиллированная вода — 1000 мл.

После застывания в агаре делают лунки по трафарету диаметром 4—5 мм, помещенному под предметное стекло с агаром. Агаровые столбики вынимают ученическим пером. Лунки в агаре заполняют компонентами по схеме.

От крупных животных исследуют все отделы головного мозга (левой и правой стороны), от средних (крысы, хомяки и др.) — какие-либо три отдела мозга, у мышей — весь мозг. С помощью пинцета из мозга готовят пастообразную массу, которую и помещают в соответствующие лунки.

Контроли с положительным и отрицательным антигенами ставят на отдельном стекле по тому же трафарету.

После заполнения лунок компонентами препараты помещают во влажную камеру и ставят в термостат при 37 °С на 6 ч, затем оставляют при комнатной температуре на 18 ч. Учет результатов ведут в течение 48 ч.

Реакцию считают положительной при появлении между лунками, содержащими суспензию мозга и антирабический γ-глобулин, одной или двух-трех линий преципитации любой интенсивности.

Бактериальная контаминация и загнивание мозга не препятствуют использованию его для РДП. Материал, консервированный глицерином, формалином и другими средствами, для РДП непригоден.

Выявление телец Бабеша—Негри. На предметных стеклах делают тонкие мазки или отпечатки из всех отделов головного мозга (как для РИФ), не менее двух препаратов из каждого отдела мозга, и окрашивают по одному из методов (по Селлерсу, Муромцеву, Манну, Ленцу и т. д.).

Пример окраски по Селлерсу: на свежий, невысохший препарат наносят краситель (одна часть 1%-ного раствора основного фуксина, смешанная с двумя частями 1%-ного метилового синего), покрывая им весь препарат, выдерживают 10—30 с и смывают фосфатным буфером (pH 7,0—7,5), высушивают в вертикальном положении при комнатной температуре (в затемненном месте) и просматривают под микроскопом с масляной иммерсией.

Положительным результатом считают наличие телец Бабеша—Негри — четко очерченных овальных или продолговатых гранулированных образований розово-красного цвета, расположенных в цитоплазме клеток или вне их.

Данный метод имеет диагностическое значение только при обнаружении типичных специфических включений.

Биопроба. Она более эффективна по сравнению со всеми указанными выше методами. Ее ставят при получении отрицательных результатов предыдущими методами и в сомнительных случаях.

Для биопробы отбирают белых мышей массой 16—20 г. Нервную ткань из всех отделов головного мозга растирают в ступке со стерильным песком, добавляют физиологический раствор до получения 10%-ной суспензии, отстаивают 30—40 мин и используют надосадочную жидкость для заражения мышат. При подозрении на бактериальное загрязнение добавляют на 1 мл суспензии по 500 ЕД пенициллина и стрептомицина и выдерживают 30—40 мин при комнатной температуре.

На одну биопробу заражают 10 — 12 мышат: половину интрацеребрально по 0,03 мл, половину подкожно в область носика или в верхнюю губу по 0,1—0,2 мл.

Зараженных мышат помещают в стеклянные банки (лучше аквариумы) и наблюдают за ними в течение 30 дней, ведя ежедневную регистрацию. Гибель мышей в течение 48 ч считают неспецифической и не учитывают в оценке результатов. При наличии вируса бешенства в патологическом материале с 7—10-го дня после заражения у мышей наблюдают следующие симптомы: взъерошенность шерсти, своеобразную горбатость спины, нарушение координации движений, паралич задних, затем передних конечностей и гибель. У павших мышей головной мозг исследуют в РИФ, на обнаружение телец Бабеша—Негри и ставят РДП.

Биопробу на бешенство считают положительной, если в препаратах из мозга зараженных мышат обнаруживают тельца Бабеша— Негри или выявляют антиген методами РИФ или РДП. Отрицательный диагноз — отсутствие гибели мышат в течение 30 дней.

Рекомендуют для ранней диагностики методом биопробы (особенно это важно, когда исследуемое животное покусало человека) использовать для заражения не 10—12, а 20—30 мышат, и с третьего дня после заражения ежедневно забивать по 1—2 мышонка для исследования их головного мозга в РИФ. Это позволяет (в положительных случаях) сократить срок исследования на несколько дней.

В лабораторной практике иногда ставят метод так называемой специфической биопробы. Сущность его в том, что мыши заболевают при заражении мозговой тканью больных бешенством животных и не заболевают, если эту ткань предварительно обработать (10 мин при 37 °С) антирабической сывороткой.

Некоторые исследователи рекомендуют проводить прижизненную диагностику бешенства методом иммунофлуоресцентного исследования отпечатков роговицы подозреваемых в заболевании бешенством животных, но эффективность этого метода невысока.

Обычно в лаборатории проводят исследование в следующей последовательности: из головного мозга делают мазки-отпечатки для РИФ и обнаружения телец Бабеша—Негри, ставят РДП, при получении отрицательных результатов делают биопробу.

При высококвалифицированном выполнении РИФ получают 99—100 % совпадения с биопробой. Тельца Бабеша—Негри выявляют лишь в 65—85 % случаев бешенства, в РДП — от 45 до 70 %.

Специфическая профилактика. В настоящее время для профилактики бешенства применяют инактивированные и живые вакцины. Условно вакцины можно разделить:

на вакцины первого поколения, которые готовят из головного мозга животных, инфицированных фиксированным вирусом бешенства;

вакцины второго поколения, которые готовят из штаммов вируса бешенства, адаптированных к культуре клеток;

вакцины третьего поколения, которые получают с помощью генно-инженерных методов.

За рубежом разработали и в некоторых странах успешно применяют рекомбинантную вакцину, которая содержит рекомбинантный вирус оспы, несущий ген основного гликопротеина оболочки вируса бешенства.

В настоящее время начата разработка и показана возможность применения ДНК-вакцин для профилактики бешенства. В России и СНГ широко применяют инактивированную вакцину из штамма Щелково-51, которую готовят с использованием культуры клеток ВНК-21.

Достижения науки по оральной вакцинации лисиц в естественных условиях природы представляют значительную веху в борьбе с природными очагами инфекции.